比的VPN溶液與siRNA溶液均勻混合，借助靜電吸附作用使siRNA負載于VPN 形成復合物。 2. VPNs與 si-VPNs的制備與表征 研究團隊成功制備了在酸性環(huán)境下可調(diào)整尺寸和電荷、因而更易滲透軟骨的VPN納米顆粒。通過微流控制備方法，VPN可以高效包裹siRNA形成si-VPN，后者不易被酶降解。VPN是空心囊泡，包裹siRNA后變成實心小球。 3. 體外轉(zhuǎn)染與RNA干擾效能 研究團隊發(fā)現(xiàn)，在軟骨細胞中，si-VPN-2（–[(R)5-(H)4]2–）比傳統(tǒng)載體（如MC3-LNP）攝取效率更高；在軟骨小球模型中，si-VPN-2能穿透到小球中心，其他載體多停在表面； si-VPN-2 能高效沉默MMP-13，可發(fā)揮基因治療作用。 4. MMP-13沉默影響體外基因表達譜 研究團隊進一步驗證了si-VPN-2臨床應用前景，證實在患者原代軟骨細胞中，si-VPN-2的細胞攝取高（較傳統(tǒng)MC3-LNP高3倍多），無聚集，可高效實現(xiàn)溶酶體逃逸，使MMP-13 高效表達沉默；通過基因測序發(fā)現(xiàn)，si-VPN-2能調(diào)控OA相關基因，影響 OA關鍵通路。5. 納米-凝膠si-VPN@HA的構建、釋放與關節(jié)滯留 基于上述研究成功，研究團隊構建了一種ROS響應型 si-VPN@HA 納米凝膠，該凝膠可根據(jù)環(huán)境ROS水平響應性釋放釋放 si-VPN-2；釋放的si-VPN-2仍有高軟骨穿透能力。si-VPN@HA可在關節(jié)內(nèi)滯留超21天，調(diào)和了穿透和滯留的困境。 6. 在外科ACTL模型中通過si-VPN@HA治療緩解軟骨變性 研究團隊在在ACLT OA小鼠模型中證實si-VPN@HA的作用效果： 較 si-VPN-2、si-MC3-LNP 更能減輕軟骨退變，OARSI 評分接近假手術組； 可實現(xiàn)約75% MMP-13體內(nèi)沉默，下調(diào)NGF、MMP-9等信號，緩解疼痛與軟骨分解； 調(diào)節(jié)巨噬細胞表型（減M1、增M2）并降低炎癥基因，且安全性良好。 7. PTOA模型與類固醇協(xié)同治療實現(xiàn)更優(yōu)關節(jié)保護 證實在PTOA小鼠模型中： si-VPN@HA與內(nèi)固醇合用更能保護關節(jié)功能，減輕軟骨退變與骨贅形成。 8. 關節(jié)內(nèi)mRNA遞送的功能驗證 進一步地，研究團隊使用微流控制備儀將VPN與mRNA混合，制備含mRNA的納米顆粒即m-VPNs，證明m-VPN-2的體外轉(zhuǎn)染效率、體內(nèi)軟mRNA遞送效果均顯著優(yōu)于m-VPN-1及m-MC3-LNP。 知識分享：研究亮點 1、本文創(chuàng)新設計出受病毒啟發(fā)的模塊化脂肽基納米顆粒（VPN），以含可變/的陽離子部分為核心功能組件，優(yōu)化后的VPN-2轉(zhuǎn)染效率較傳統(tǒng)脂質(zhì)納米顆粒提升約2.5倍，且具備pH敏感性與軟骨靶向性，可高效遞送核酸至軟骨細胞并實現(xiàn)溶酶體逃逸。 2、為解決關節(jié)內(nèi)遞送的 “穿透-滯留” 矛盾，構建ROS響應型si-VPN@HA凝膠內(nèi)納米系統(tǒng)，該系統(tǒng)在OA高ROS環(huán)境下可釋放si-VPN-2，在ACLT小鼠中減輕軟骨退變，與聯(lián)用還能在PTOA小鼠中實現(xiàn)更優(yōu)關節(jié)保護。 3、研究同時驗證VPN-2可作為mRNA遞送載體，在體外細胞與ACLT小鼠體內(nèi)均展現(xiàn)出優(yōu)異的mRNA轉(zhuǎn)染效果，證實其作為軟骨靶向核酸遞送平臺的通用性，為骨關節(jié)炎創(chuàng)新治療提供新策略。 蘇州艾特森制藥設備有限公司先后研發(fā)了微流控制備儀、脂質(zhì)體擠出儀、高壓均質(zhì)機、旋轉(zhuǎn)滅菌柜、超濾系統(tǒng)等設備，已通過ISO9001國際質(zhì)量管理體系、歐盟CE、國家企業(yè)、專精特新中小企業(yè)等多項認證，服務于數(shù)百家科研單位及制藥企業(yè)，是國內(nèi)納米制劑核心工藝設備的重要供應商，自成立以來一直致力于自主研發(fā)，專注微納米制劑核心工藝設備設計、制造與產(chǎn)業(yè)化技術服務。 公司地址：蘇州市工業(yè)園區(qū)蘇虹東路188號A幢121-123室 聯(lián)系我們：4001013307
歡迎光臨 制造論壇-制造行業(yè)自己的交流社區(qū)! (http://www.iseewow.cn/)
Powered by Discuz! X3.5